二、正痘病毒属(Orthopoxvirus)

二、正痘病毒属(Orthopoxvirus) ��

痘苗病毒、天花病毒、牛痘病毒、兔痘病毒、小鼠脱脚病病毒（鼠痘病毒）、水牛痘病毒、骆驼痘病毒、马痘病毒以及猴痘病毒等均属于正痘病毒范畴。其中，痘苗病毒被视为典型代表。这些病毒形态呈砖状，尺寸约为200纳米×200纳米×250纳米，各成员间共享相同的抗原特性，且其基因组之间能够发生重组，在血清学检测中表现出显著的交叉反应现象。感染了正痘病毒的细胞以及病毒粒子的外层结构中存在血凝素蛋白，这些蛋白大多能够使火鸡和鸡的红细胞发生凝集现象，然而，某些痘苗、兔痘的HA-自然变异病毒株却无法引起这些动物的红细胞凝集。正痘病毒能够感染来自哺乳动物的大多数培养细胞，然而在自然界中，它对宿主的感染表现出特定的种属特异性。其DNA的长度介于170至250碱基对之间，G+C的含量大约为36%。

��

(一) 牛痘病毒��(Cowpox virus)

牛痘是一种良性病症，主要在乳牛身上出现，主要影响乳房和乳头部位的皮肤。这种疾病通常是通过挤乳工人的手或者挤乳机进行传播。而那些已经停止产奶的母牛、未交配的处女牛、公牛、用于劳作的役用牛以及肉用牛等，很少会患上牛痘。此外，挤乳工人还可能将刚刚接种的痘苗病毒传播给牛，其症状与牛痘无异。

牛痘病毒展现出痘病毒特有的形态与理化属性。其基因组长度达到222碱基对。在水疱液制成的涂片上，通过姬姆萨染色后，在显微镜下可观察到成熟的病毒颗粒（原生小体）。若采用镀银法进行染色，观察效果更为显著。此外，该病毒含有血凝素，能够使火鸡和鸡的红细胞发生凝集，但凝集效果相对较弱。

牛痘病毒在抗原性方面与痘苗病毒及天花病毒表现出极高的相似度。它们之间存在的细微抗原差异，有人认为这仅仅是数量上的区别，可以通过交叉补体结合实验、琼脂扩散实验以及抗体吸收实验来检测到。而中和试验在特异性方面表现更为突出。

牛痘病毒在鸡胚绒毛尿囊膜上生长良好，能够形成出血性的痘斑，这一现象是由于病毒倾向于侵袭中胚层组织，破坏毛细血管的内皮细胞所致。在感染量较大时，鸡胚可能会死亡。然而，在40℃以上的高温环境下，病毒无法形成出血性痘斑。近期，频繁出现导致白色痘斑的突变病毒株。牛痘病毒能够在多种组织培养细胞中繁殖，并在鸡胚细胞、人胚肾细胞以及牛胚肾细胞等培养物中引发蚀斑、合胞体形成和细胞膨胀等典型的细胞病变现象。

病毒在自然环境中仅对母牛的乳头及乳房皮肤造成损害。其潜伏期介于3至8天之间。疾病初期，病牛体温可能略有上升，食欲也会有所减少。在挤奶过程中，乳头和乳房的敏感性增强，局部温度有所上升。紧接着，乳头及其周围的乳房皮肤上会出现数个至十数个红色丘疹，经过1至2天，这些丘疹会演变成豌豆大小的水疱，水疱内含有棕黄色或红色的淋巴液。之后数日，水疱中央部分出现塌陷，四周则隆起，形似脐部，并且很快开始化脓，最终形成痂壳，整个过程大约持续三周。痂壳脱落之后，会留下白色的疤痕。有时水疱会合并，并且经常在挤奶过程中破裂，留下鲜红的伤口。在没有细菌继发感染的情况下，病牛通常不会出现全身性的症状。一旦这种疾病传入牛群，就会迅速蔓延，直至所有母牛都被感染。牛痘病毒不仅会传播给挤奶工，导致他们手、臂乃至脸部出现痘疹，其症状甚至比初次接种痘苗时的反应更为剧烈，且病灶往往会出现坏死。在实验感染过程中，牛痘病毒对家兔、豚鼠、小鼠和猴子等动物同样具有高度的感染性。据Marennikova等人在1975年报道，在莫斯科动物园，狮子和穿山甲也曾爆发过牛痘疫情。此外，牛痘病毒还能感染大象和老虎。除皮肤病变外 ，某些动物还发生致死性肺炎。��

牛痘康复后，个体能够保持数年的免疫状态。通过接种痘苗，同样可以有效防止牛痘的侵袭。然而，鉴于牛痘并非致命疾病，且其发病率并不高，痘苗接种通常仅在特定情形下被考虑采用。依据乳头和乳房皮肤上特有的病变以及牛群中迅速蔓延的流行病学特征，可以准确进行诊断。确诊时宜选用水庖液，经磷钨酸负染处理，随后进行电镜观察，不仅可观察到痘病毒的典型颗粒，而且能够与假牛痘病毒（副痘病毒）、口蹄疫病毒、牛溃疡性乳头炎病毒（疱疹病毒）以及牛乳头状瘤病毒进行明确区分。实验室中，可利用外科小刀从丘疹部位刮取表皮细胞，亦或吸取痘疱内的物质，并采集痘基部的细胞。随后，将这些细胞涂于玻片上，采用银染技术进行染色处理。在光学显微镜的油镜下观察，可以观察到呈暗褐色、椭圆形或长方形的病毒颗粒。与样本中的葡萄球菌相比，这些病毒颗粒的直径大约是葡萄球菌的三分之一。病毒颗粒通常以短链状或成对的形式排列。水疱液可用于接种鸡胚、培养单层细胞或在家兔皮肤或眼角膜上进行划痕接种。牛痘病毒在鸡胚绒毛尿囊上常形成红色的出血性痘斑。接种于家兔角膜后，次日划痕处会出现小透明增生，滴加可卡因后，切除角膜制作标本，进行HE染色，可在胞浆中发现包涵体。若用升汞和酒精固定角膜，则能观察到明显的圆形混浊斑点。家兔接种后，皮肤表面出现痘疱，并伴随有宽阔的炎症性红晕。接种病毒的单层细胞，诸如鸡胚细胞和牛胚肾细胞等，在感染后的一到两天内，会出现蚀斑和细胞病变，细胞浆突起伸长，形成网状结构。感染细胞内部可见嗜酸性大型A型包涵体。若以化脓的痘疱液、痘疱皮或痂皮作为接种材料，需将其充分研磨，并经过青霉素和链霉素的处理后使用。使用痘疱材料制备的涂片，通过荧光抗体染色技术，能够检测到病毒抗原，然而由于非特异性荧光信号较强，因此在进行判断时需格外小心开yun体育app官网网页登录入口，并且需要设置多种对照实验。此外，若先将病料接种于组织培养细胞中，经过1至2天的孵育，随后再进行荧光抗体染色，所得结果将更为可信。同时，将病料与高价免疫血清进行琼脂扩散试验，通常在4至5小时内即可观察到特异性沉淀线。若缺乏特定抗原作为参照，便难以区分痘苗病毒与天花病毒。补体结合反应的检测灵敏度较高。一般使用痘疱液，以生理盐水进行1：5比例稀释，随后以1500r/min的速度离心沉淀15分钟kaiyun全站网页版登录，提取上清液，并在58℃下加热30分钟后，将其作为待检抗原。若为痂皮，需取一克放入干燥的容器中，进行4至5小时的干燥处理；随后，使用玻璃粉将其研磨至细腻，再加入5毫升乙醚，振荡搅拌10分钟；稍作静置后，吸去乙醚，并将混合物置于37℃的环境下，加速乙醚的蒸发。将磨细的痂皮用生理盐水稀释至1：20至1：50的比例，然后在室温下浸泡两小时，期间需不断振荡。之后，以每分钟1500转的速度离心沉淀十五分钟kaiyun全站登录网页入口，接着取出上清液。将上清液在58℃下加热三十分钟，以此作为待检测的抗原。最后，采用高免血清，按照常规方法进行补体结合实验。高免血清通常通过家兔来制备，具体操作是将牛痘病毒接种于家兔的胁腹部，形成划痕。待痘疱生成并结痂后，经过4周的等待，采集其血清即可得到。在进行补体结合试验时，必须设立多种标准抗原对照，这样才能有可能检测出牛痘病毒、痘苗病毒以及天花病毒之间的抗原差异。